一、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試，具體內(nèi)容可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。
二、取材
在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的**培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。
理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡快培養(yǎng)，因故不能馬上培養(yǎng)時(shí)，可將組織塊切成黃豆般大的小塊，置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無菌，同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌，為減少污染可用抗菌素處理。
由組織并分離分散細(xì)胞的方法可參閱有關(guān)文獻(xiàn)。
三、培養(yǎng)
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng)，一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次，觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好，形態(tài)是否正常，有無污染，培養(yǎng)基的PH是否太酸或太堿（由酚紅指示劑指示），此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2濃度也要定時(shí)檢查。
一般原代培養(yǎng)進(jìn)入培養(yǎng)后有一段潛伏期（數(shù)小時(shí)到數(shù)十天不等），在潛伏期細(xì)胞一般不分裂，但可貼壁和游走。過了潛伏期后細(xì)胞進(jìn)入旺盛的分裂生長(zhǎng)期。細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底后要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，將一瓶中的細(xì)胞消化懸浮后分**兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為“一代”。二倍體細(xì)胞一般只能傳幾十代，而轉(zhuǎn)化細(xì)胞系或細(xì)胞株則可無限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細(xì)胞可能具有惡性性質(zhì)，也可能僅有不死性（Immortality）而無惡性。
培養(yǎng)正在生長(zhǎng)中的細(xì)胞是進(jìn)行各種生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)的良好材料。
四、凍存及復(fù)蘇
為了保存細(xì)胞，特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株，要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度—－196℃，將細(xì)胞收集**凍存管中加入含保護(hù)劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，**終保存于液氮中。在極低的溫度下，細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無限的。
復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
凍存過程中保護(hù)劑的選用、細(xì)胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時(shí)溫度、融化速度等都對(duì)細(xì)胞活力有影響。
培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué) 
一、體內(nèi)、外細(xì)胞的差異和分化
1、差異：細(xì)胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細(xì)胞間的相互影響，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的相對(duì)穩(wěn)定環(huán)境中，日久天長(zhǎng)，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時(shí)間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無限生長(zhǎng)的連續(xù)細(xì)胞系或惡性細(xì)胞系。因此，培養(yǎng)中的細(xì)胞可視為一種在特定的條件下的細(xì)胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細(xì)胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細(xì)胞的性狀。實(shí)際上從細(xì)胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。
雖然體外細(xì)胞與機(jī)體細(xì)胞存有差異，但并未失去研究的意義。且不論其有許多性狀仍與體內(nèi)相同（如體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞仍可博動(dòng)），只從細(xì)胞遺傳學(xué)（Cyto－genetics）的角度看，離體細(xì)胞仍帶有全套的二倍體基因。細(xì)胞在培養(yǎng)中的表現(xiàn)，只不過是相應(yīng)基因關(guān)閉／開啟引起的現(xiàn)象，這并非是**缺陷。恰恰相反，在培養(yǎng)的細(xì)胞中某些特定功能的喪失，可為該基因的表達(dá)與調(diào)控提供線索。
2、分化；體外培養(yǎng)的細(xì)胞分化能力并未完全喪失，只是環(huán)境的政變，細(xì)胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細(xì)胞是否表現(xiàn)分化關(guān)鍵在于是否存在使細(xì)胞分化的條件，如Friend細(xì)胞（小鼠紅白血病細(xì)胞）在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白，血管內(nèi)皮細(xì)胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時(shí)能長(zhǎng)成血管狀結(jié)構(gòu)，雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體，這些均屬于細(xì)胞分化行為。
二、體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型
（一）貼附型：大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞，判斷細(xì)胞形態(tài)時(shí)不能接體內(nèi)組織學(xué)標(biāo)推判定，僅大致分成以下四型：
1、成纖維細(xì)胞型：胞體呈梭型或不規(guī)則三角形，中央有卵圓形核，胞質(zhì)突起，生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀。除真正的成纖維細(xì)胞外，凡由中胚層間充質(zhì)起源的組織，如心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀態(tài)。另外，凡培養(yǎng)中細(xì)胞的形態(tài)與成纖維類似時(shí)皆可稱之為成纖維細(xì)胞。
2、上皮型細(xì)胞：細(xì)胞呈扁平不規(guī)則多角形，中央有圓形核，細(xì)胞彼此緊密相連成單層膜。生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng)，處于膜邊緣的細(xì)胞總與膜相連，很少單獨(dú)行動(dòng)。起源于內(nèi)、外胚層的細(xì)胞如皮膚表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形態(tài)。#p#分頁標(biāo)題#e##p#分頁標(biāo)題#e#
3、游走細(xì)胞型：呈散在生長(zhǎng)，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng)，方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定，有時(shí)難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。
4、多型細(xì)胞型：有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。
（二）懸浮型；見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易大量繁殖。
三、培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過程
體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)在動(dòng)態(tài)平衡環(huán)境中，而組織培養(yǎng)細(xì)胞的生存環(huán)境是培養(yǎng)瓶、皿或其它容器，生存空間和營(yíng)養(yǎng)是有限的。當(dāng)細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要分離出一部分細(xì)胞和更新營(yíng)養(yǎng)液，否則將影響細(xì)胞的繼續(xù)生存，這一過程叫傳代（Passage或Subculture）。每次傳代以后，細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過程都會(huì)受一定的影響。另外，很多細(xì)胞特別是正常細(xì)胞，在體外的生存也不是無限的，存在著一個(gè)發(fā)展過程。所有這一切，使組織細(xì)胞在培養(yǎng)中有著一系列與體內(nèi)不同的生存特點(diǎn)。
（一）培養(yǎng)細(xì)胞生命期（Life Span of Culture Cells）
所謂培養(yǎng)細(xì)胞生命期，是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間。體內(nèi)組織細(xì)胞的生存期與完整機(jī)體的死亡衰老基本相一致。組織和細(xì)胞在培養(yǎng)中生命期如何？這要看細(xì)胞的種類、性狀和原供體的年齡等情況。人胚二倍體成纖維細(xì)胞培養(yǎng)，在不凍存和反復(fù)傳代條件下，可傳30～50代，相當(dāng)于150～300個(gè)細(xì)胞增殖周期，能維待一年左右的生存時(shí)間，**后衰老凋亡（Apoptosis）。如供體為成體或衰老個(gè)體，則生存時(shí)間較短；如培養(yǎng)的為其它細(xì)胞如肝細(xì)胞或腎細(xì)胞，生存時(shí)間更短，僅能傳幾代或十幾代。只有當(dāng)細(xì)胞發(fā)生遺傳性改變，如獲永生性或惡性轉(zhuǎn)化時(shí)，細(xì)胞的生存期才可能發(fā)生改變。對(duì)此以后將詳述。
正常細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，不論細(xì)胞的種類和供體的年齡如何，在細(xì)胞全生存過程中，大致都經(jīng)歷以下三個(gè)階段：
1．原代培養(yǎng)（Primary Culture）期：
也稱初代培養(yǎng)，即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到**次傳代階段，一般持續(xù)1一4周。此期細(xì)胞呈活躍的移動(dòng)，可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。初代培養(yǎng)細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上相似性大。細(xì)胞群是異質(zhì)的（Heterogeneous），也即各細(xì)胞的遺傳性狀互不相同，細(xì)胞相互依存性強(qiáng)。如把這種細(xì)胞群稀釋分散成單細(xì)胞，在軟瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞克隆形成率（Cloning Efficiency）很低，即細(xì)胞獨(dú)立生存性差?？寺⌒纬陕始醇?xì)胞群被稀釋分散成單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，形成細(xì)胞小群（克?。┑陌俜?jǐn)?shù)。初代培養(yǎng)細(xì)胞多呈二倍體核型；由于原代培養(yǎng)細(xì)胞和體內(nèi)細(xì)胞性狀相似性大，是檢測(cè)藥物很好的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
2．傳代期：
初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱做細(xì)胞系（Cell Line）。在全生命期中此期的持續(xù)時(shí)間**長(zhǎng)。在培養(yǎng)條件較好情況下，細(xì)胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型，呈二倍體核型的細(xì)胞稱二倍體細(xì)胞系（Diploid Cell Line）。為保持二倍體細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。當(dāng)前世界上常用細(xì)胞均在不出十代內(nèi)凍存。如不凍存，則需反復(fù)傳代以維持細(xì)胞的適宜密度，以利于生存。但這樣就有可能導(dǎo)致細(xì)胞失掉二倍體性質(zhì)或發(fā)生轉(zhuǎn)化。一般情況下當(dāng)傳代10～50次左右，細(xì)胞增殖逐漸緩慢，以**完全停止，細(xì)胞進(jìn)入第三期。
3．衰退期：
此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，**后衰退凋亡。在細(xì)胞生命期階段，少數(shù)情況下，在以上三期任何一點(diǎn)（多發(fā)生在傳代末或衰退期），由于某種因素的影響，細(xì)胞可能發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化（Spontaneous Transformation）。轉(zhuǎn)化的標(biāo)志之一是細(xì)胞可能獲得永生性（Immortality）或惡性性（Malignancy）。細(xì)胞永生性也稱不死性，即細(xì)胞獲持久性增殖能力，這樣的細(xì)胞群體稱無限細(xì)胞系（Infinite Cell Line），也稱連續(xù)細(xì)胞系（Continuous Cell Line）。在早期文獻(xiàn)中無限細(xì)胞系也稱已建立細(xì)胞系（Established Cell Line），現(xiàn)已不用。無限細(xì)胞系的形成主要發(fā)生在第二期末，或第三期初階段。細(xì)胞獲不死性后，核型大多變成異倍體（Heteroploid）。細(xì)胞轉(zhuǎn)化亦可用人工方法誘發(fā)，轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞也可能具有惡性性質(zhì)。細(xì)胞永生性和惡性性非同一性狀。
（二）組織培養(yǎng)細(xì)胞一代生存期
所有體外培養(yǎng)細(xì)胞，包括初代培養(yǎng)及各種細(xì)胞系，當(dāng)生長(zhǎng)達(dá)到一定密度后，都需做傳代處理。傳代的頻率或間隔與培養(yǎng)液的性質(zhì)、接種細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞增殖速度等有關(guān)。接種細(xì)胞數(shù)量大、細(xì)胞基數(shù)大、相同增殖速度條件下，細(xì)胞數(shù)量增加與飽和速度相對(duì)要快（實(shí)際上細(xì)胞接種數(shù)量大時(shí)細(xì)胞增殖速度比**時(shí)要快）。連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞系比初代培養(yǎng)細(xì)胞增殖快，培養(yǎng)液中血清含量多時(shí)細(xì)胞增殖比少時(shí)快。以上情況都會(huì)縮短傳代時(shí)間。
所謂細(xì)胞“一代”一詞，系僅指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)時(shí)的一段時(shí)間，這已成為培養(yǎng)工作中的一種習(xí)慣說法，它與細(xì)胞倍增一代非同一含義。如某一細(xì)胞系為第153代細(xì)胞，即指該細(xì)胞系已傳代153次。它與細(xì)胞世代（Generation）或倍增〔Doubling）不同；在細(xì)胞一代中，細(xì)胞能倍增3～6次。細(xì)胞傳一代后，一般要經(jīng)過以下三個(gè)階段：
1．潛伏期（Latent Phase）：
細(xì)胞接種培養(yǎng)后，先經(jīng)過一個(gè)在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期。此時(shí)細(xì)胞胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。接著是細(xì)胞附著或貼附于底物表面上，稱貼壁，懸浮期結(jié)束。各種細(xì)胞貼附速度不同，這與細(xì)胞的種類、培養(yǎng)基成分和底物的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。初代培養(yǎng)細(xì)胞貼附慢，可長(zhǎng)達(dá)10～24小時(shí)或更多；連續(xù)細(xì)胞系和惡性細(xì)胞系快，10～30分鐘即可貼附。細(xì)胞貼附現(xiàn)象是一個(gè)非常復(fù)雜和與多種因素相關(guān)的過程。支持物能影響細(xì)胞的貼附；底物表面不潔不利貼附，底物表面帶有陽性電荷利于貼附。另外在貼附過程中，有一些特殊物質(zhì)如纖維連接素（Fibronectin），又稱LETS（Larger External Transformation Substance），細(xì)胞表面蛋白（Cell Surface Protein：CSP）等也參與貼附過程。這些物質(zhì)都是蛋白類成分，它們有的存在于細(xì)胞膜的表面（如 CSP），有的則來自培養(yǎng)基中的血清（LETS）。近年又從各種不同組織和生物成分中提取出了很多促貼附物質(zhì)。貼附是貼附類細(xì)胞生長(zhǎng)增殖條件之一。#p#分頁標(biāo)題#e##p#分頁標(biāo)題#e#
細(xì)胞貼附于支持物后，除先經(jīng)過前述延展過程變成極性細(xì)胞，還要經(jīng)過一個(gè)潛伏階段，才進(jìn)入生長(zhǎng)和增殖期。細(xì)胞處在潛伏期時(shí)，可有運(yùn)動(dòng)活動(dòng)，基本無增殖，少見分裂相。細(xì)胞潛伏期與細(xì)胞接種密度、細(xì)胞種類和培養(yǎng)基性質(zhì)等密切相關(guān)。初代培養(yǎng)細(xì)胞潛伏期長(zhǎng)，約24～96小時(shí)或更長(zhǎng)，連續(xù)細(xì)胞系和腫瘤細(xì)胞潛伏期短，僅6～24小時(shí)；細(xì)胞接種密度大時(shí)潛伏期短。當(dāng)細(xì)胞分裂相開始出現(xiàn)并逐漸增多時(shí)，標(biāo)志細(xì)胞已進(jìn)入指數(shù)增生期。
2．指數(shù)增生期（Logarithmic growth Phase）：
這是細(xì)胞增值**旺盛的階段，細(xì)胞分裂相增多。指數(shù)增生期細(xì)胞分裂相數(shù)量可作為判定細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛與否的一個(gè)重要標(biāo)志。一般以細(xì)胞分裂（Mitotic Index：MI）表示，即細(xì)胞群中每1000個(gè)細(xì)胞中的分裂相數(shù)。體外培養(yǎng)細(xì)胞分裂指數(shù)受細(xì)胞種類、培養(yǎng)液成分、pH、培養(yǎng)箱溫度等多種因素的影響。一般細(xì)胞的分裂指數(shù)介于0.1%～0.5%，初代細(xì)胞分裂指數(shù)低，連續(xù)細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞分裂指數(shù)可高達(dá)3%～5%。pH和培養(yǎng)液血清含量變動(dòng)對(duì)細(xì)胞分裂指數(shù)有很大影響。指數(shù)增生期是細(xì)胞一代中活力**好的時(shí)期，因此是進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)**好的和**主要的階段。在接種細(xì)胞數(shù)量適宜情況下，指數(shù)增生期持續(xù)3～5天后，隨細(xì)胞數(shù)量不斷增多、生長(zhǎng)空間漸趨減少、**后細(xì)胞相互接觸匯合成片。細(xì)胞相互接觸后，如培養(yǎng)的是正常細(xì)胞，由于細(xì)胞的相互接觸能抑制細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)，這種現(xiàn)象稱接觸抑制（Contact Inhibition）。而惡性細(xì)胞則無接觸抑制現(xiàn)象，因此接觸抑制可作為區(qū)別正常與癌細(xì)胞標(biāo)志之一。腫瘤細(xì)胞由于無接觸抑制能繼續(xù)移動(dòng)和增殖，導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴(kuò)展，使細(xì)胞發(fā)生堆積（Piled up）。細(xì)胞接觸匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，只要營(yíng)養(yǎng)充分，細(xì)胞仍然能夠進(jìn)行增殖分裂，因此細(xì)胞數(shù)量仍在增多。但當(dāng)細(xì)胞密度進(jìn)一步增大，培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時(shí)，細(xì)胞因營(yíng)養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，則發(fā)生密度抑制（Density Inhibition），導(dǎo)致細(xì)胞分裂停止。因此細(xì)胞接觸抑制和密度抑制是兩個(gè)不同的概念，不應(yīng)混淆。
3．停滯期（Stagnate Phase）：
細(xì)胞數(shù)量達(dá)飽和密度后，細(xì)胞遂停止增殖，進(jìn)入停滯期。此時(shí)細(xì)胞數(shù)量不再增加，故也稱平頂期（Plateau）。停滯期細(xì)胞雖不增殖，但仍有代謝活動(dòng)，繼而培養(yǎng)液中營(yíng)養(yǎng)漸趨耗盡，代謝產(chǎn)物積累、pH降低。此時(shí)需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細(xì)胞會(huì)中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡，故傳代應(yīng)越早越好。傳代過晚（已有中毒跡象）能影響下一代細(xì)胞的機(jī)能狀態(tài)。在這種情況下，雖進(jìn)行了傳代，因細(xì)胞已受損，需要恢復(fù)，**少還要再傳1～2兩代，通過換液淘汰掉死細(xì)胞和使受損輕微的細(xì)胞得以恢復(fù)后，才能再用。結(jié)果反而耽誤了時(shí)間，這是在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)特別注意的。
建立細(xì)胞系或細(xì)胞株 
各種已被命名和經(jīng)過細(xì)胞生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系或細(xì)胞株，都是一些形態(tài)比較均一、生長(zhǎng)增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細(xì)胞群。因此凡符合上述情況的細(xì)胞群也可給以相應(yīng)的名稱，即文獻(xiàn)中常稱之為已鑒定的細(xì)胞（Certified Cells）。已鑒定的細(xì)胞可用于各種實(shí)驗(yàn)研究和生產(chǎn)生物制品。當(dāng)前世界上已建的各種細(xì)胞系（株）已難勝數(shù)，我G也建有百種以上，并在不斷增長(zhǎng)中。
一、體外培養(yǎng)細(xì)胞的種類和命名
體外培養(yǎng)細(xì)胞的名稱，隨培養(yǎng)細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展和細(xì)胞種類的增多而演變。**早采用的名稱為細(xì)胞株（Cell strain），以后又出現(xiàn)細(xì)胞系（Cell Line）一詞，兩者曾一度混用致概念不明確，導(dǎo)致文獻(xiàn)中也很混亂。我G也曾有類似情況，在我G尚未制定出統(tǒng)一名詞前，本書用的名詞基本參考Schaeffer，W.I.（1979）和G內(nèi)有關(guān)會(huì)議、以及G內(nèi)外雜志常用名詞為準(zhǔn)。
（一）初代培養(yǎng)
初代培養(yǎng)又稱原代培養(yǎng)，即直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的**次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)（Subculture）的細(xì)胞，便不再稱為初代培養(yǎng)，而改稱為細(xì)胞系。
（二）細(xì)胞系
初代培養(yǎng)物開始**次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞，即稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系（Finite Cell Line）；已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系，稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系（Infinite Cell Line）。無限細(xì)胞系大多已發(fā)生異倍化，具異倍體核型，有的可能已成為惡性細(xì)胞，因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。無限細(xì)胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接觸抑制和無異體接種致癌性；有的不僅有永生性，異體接種也有致瘤性，說明已惡性化。這兩種不同性質(zhì)的無限細(xì)胞系，在G內(nèi)外文獻(xiàn)中對(duì)這些名詞的應(yīng)用上也常不十分嚴(yán)格。為概念上的明確，本書中對(duì)有惡性的無限細(xì)胞系采用“惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞系”一詞表示可能更妥。而對(duì)那些只具永生性而無惡性的細(xì)胞系，則用無限細(xì)胞系或轉(zhuǎn)化細(xì)胞系即可。當(dāng)前流傳的NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均屬這類細(xì)胞系。
由某一細(xì)胞系分離出來的、在性狀上與原細(xì)胞系不同的細(xì)胞系，稱該細(xì)胞系的亞系（Subline）。
（三）克隆細(xì)胞株
從一個(gè)經(jīng)過生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群，稱細(xì)胞株。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群，亦可稱之為亞株（Substrain）
（四）二倍體細(xì)胞
細(xì)胞群染色體數(shù)目具有與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同（2n細(xì)胞占75％或80％以上）的細(xì)胞群，稱二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細(xì)胞系。但隨供體年齡和組織細(xì)胞的不同，二倍體細(xì)胞的壽命長(zhǎng)短各異。人胚肺成纖維細(xì)胞可傳50代土10代，人胚腎只有8～10代，人胚神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞15～30代；如從老齡個(gè)體取可傳50則細(xì)胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細(xì)胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細(xì)胞能長(zhǎng)期被利用，一般在初代或2～5代即大量?jī)龃孀鳛樵N（Stook Cells），用時(shí)再進(jìn)行繁殖，用后再繼續(xù)凍存，可供長(zhǎng)期使用或延緩細(xì)胞的衰老。#p#分頁標(biāo)題#e##p#分頁標(biāo)題#e#
（五）遺傳缺陷細(xì)胞
從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細(xì)胞）培養(yǎng)的細(xì)胞，或用人工方法誘發(fā)突變的細(xì)胞，都屬遺傳缺欠細(xì)胞。這類細(xì)胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。
（六）腫瘤細(xì)胞系或株
這是現(xiàn)有細(xì)胞系中**多的一類，我G已建細(xì)胞系主要為這類細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細(xì)胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性和異體接種致瘤性。
對(duì)已建成的各種細(xì)胞系或細(xì)胞株習(xí)慣上都給以名稱；細(xì)胞的命名無嚴(yán)格統(tǒng)一規(guī)定，大多采用有一定意義縮寫字或代號(hào)表示。但不論什么形式，均不宜太長(zhǎng)，以便記憶和了解，今別舉以下幾種代表性的細(xì)胞名稱供參考：
HeLa：為供體患者的姓名（來源于宮頸癌）
CHO：中G地鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary）
宮-743：宮頸癌上皮細(xì)胞，1974年3月建立
NIH3T3：美GG立衛(wèi)生研究所（National Institute of Health）建立；每3天傳代，每次接種3×105細(xì)胞／毫升。
二、建立細(xì)胞系（或株）的要求
關(guān)于什么樣的體外培養(yǎng)細(xì)胞群，可被確認(rèn)為是已被鑒定的細(xì)胞（Certified Cells），G際上也尚無統(tǒng)一的規(guī)定，一般依具體情況而定。在只用作初代培養(yǎng)細(xì)胞，只要供體性別、年齡等均一，取材部位及組織種類等條件穩(wěn)定，做鑒定的項(xiàng)目無需很多，有幾項(xiàng)能說明細(xì)胞的相關(guān)性狀的即可。如能長(zhǎng)期保存并可供其它研究室使用，特別是做反復(fù)傳代的細(xì)胞，習(xí)慣上有以下一些要求，并在刊物上報(bào)道時(shí)應(yīng)加以說明。
（－）組織來源
應(yīng)說明細(xì)胞供體所屬物種，來自人體，動(dòng)物或其它；供體的年齡、性別、取材的器官或組織；如系腫瘤組織，應(yīng)說明臨床病理診斷，組織來源，以及病例號(hào)等。
（二）細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)
應(yīng)了解細(xì)胞一般和特殊的生物學(xué)性狀，如細(xì)胞的一般形態(tài)、特異結(jié)構(gòu)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和分裂指數(shù)、倍增時(shí)間、接種率；特異性，如為腺細(xì)胞有否特殊產(chǎn)物包括分泌蛋白或激素等；如為腫瘤細(xì)胞，應(yīng)力求證明細(xì)胞確系來源于原腫瘤組織而非其它，并仍保持性性，為此需做軟瓊脂培養(yǎng)、異體動(dòng)物接種致瘤性和對(duì)正常組織浸潤(rùn)力等實(shí)驗(yàn)。
（三）培養(yǎng)條件和方法
各種細(xì)胞都有自己比較適應(yīng)的生存環(huán)境，因此應(yīng)指明使用的培養(yǎng)基、血清種類、用量以及細(xì)胞生存的適宜pH等。
三、已建立細(xì)胞系或株的鑒定、管理和使用
近些年，當(dāng)一個(gè)細(xì)胞系或細(xì)胞林建成后，我G常通過組織**開鑒定會(huì)的形式予以鑒定，從學(xué)術(shù)角度考慮，此舉實(shí)非必要。按G際慣例，只要研究認(rèn)真負(fù)責(zé)地把有關(guān)資料在雜志或刊物上報(bào)道，詳細(xì)介紹上述各項(xiàng)目即可。
以前因未建立統(tǒng)一的細(xì)胞庫時(shí)，對(duì)已建立的細(xì)胞系（株）多由作者單位自行保管，有浪費(fèi)人力、交流使用不便、細(xì)胞易污染和丟失等弊病。我G已初建成小規(guī)模貯存細(xì)胞機(jī)構(gòu)，待獲進(jìn)一步發(fā)展，這對(duì)我G細(xì)胞培養(yǎng)必將有更大促進(jìn)作用。
G際上美、英和日本等G已建有細(xì)胞庫；美G已有美G標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫或細(xì)胞銀行（ATCC）和人遺傳突變細(xì)胞庫（HGMR）、細(xì)胞衰老細(xì)胞庫（CAR）等，其中ATCC不僅是美G也世界**大的細(xì)胞庫。ATCC下屬有一組協(xié)作實(shí)驗(yàn)室和一個(gè)由眾多**組成的咨詢委員會(huì)。ATCC也是美GG立癌癥研究所（NCI）和美G衛(wèi)生研究所中（NIH）的資源庫，尤與NCI有密切的關(guān)系。ATCC也是世界衛(wèi)生組織WHO的G際培養(yǎng)細(xì)胞文獻(xiàn)中心。ATCC現(xiàn)液氮凍存有3200個(gè)已經(jīng)過鑒定的細(xì)胞系（1992），其中包括來自正常人和各種疾病患者的皮膚成纖維細(xì)胞系；和來自不同物種的近75個(gè)雜交瘤細(xì)胞株。ATCC接納來自世界各G已經(jīng)鑒定的細(xì)胞予以貯存，同時(shí)也向世界各G的研究者或?qū)嶒?yàn)室免費(fèi)提供研究用細(xì)胞（做盈利性研究時(shí)收費(fèi)。） ATCC接納入庫細(xì)胞時(shí)，必須符合其入庫標(biāo)準(zhǔn)， ATCC入庫細(xì)胞要求檢測(cè)項(xiàng)目如下：
培養(yǎng)簡(jiǎn)歷：組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正?；虍惓＝】禒顟B(tài)、細(xì)胞已傳代數(shù)等
凍 存 液：培養(yǎng)基和防凍液名稱
細(xì)胞活力：融解前后細(xì)胞接種存活率和生長(zhǎng)特性
培 養(yǎng) 液：培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗生素）、血清來源和含量
細(xì)胞形態(tài)：類型，如為上皮或成纖維細(xì)胞等，融解后細(xì)胞生長(zhǎng)特性
核 型：二倍體或多倍體，標(biāo)記染色體的有無
無污染檢測(cè)：包括細(xì)菌、真菌、支原體、原蟲和病毒等
物種檢測(cè)：檢測(cè)同工酶，主要為G6PD和LDH，以證明細(xì)胞有否交叉污染以及反轉(zhuǎn)錄酶檢測(cè)
免疫檢測(cè)：一兩種血清學(xué)檢測(cè)
細(xì)胞建立者：建立者姓名；檢測(cè)者姓名
以上為ATCC入庫基本要求，雜交瘤入庫標(biāo)準(zhǔn)尚有所不同，詳細(xì)情況請(qǐng)參閱ATCC的“Catalogue of Cell Lines and Hybridomas”
 
 
 
 

MTT測(cè)定CMC

1． Fen細(xì)胞培養(yǎng)于含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，在25cm2培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)到接近匯合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化細(xì)胞5分鐘，洗滌后，用細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞配成1×105#p#分頁標(biāo)題#e#/ml。 2． 取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加0.1ml細(xì)胞懸液，在37℃ 5％ CO2#p#分頁標(biāo)題#e#的飽和水汽二氧化碳培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，讓細(xì)胞帖壁。每孔加0.1ml效應(yīng)細(xì)胞懸液，效靶比10：1到50：1，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，讓效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮殺傷效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)中，設(shè)立只有靶細(xì)胞的無殺傷對(duì)照和只有 效應(yīng)細(xì)胞的陰性對(duì)照，每種處理設(shè)3各復(fù)孔。 3． 用含2％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌各孔 3次，洗去不粘附的細(xì)胞。每孔加 0.1ml含2％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液和10μl 5mg/ml的MTT染液，繼續(xù)培養(yǎng)3小時(shí)。 4． 用PBS洗滌2次，每孔加0.1ml含0.04mol/L HCl的異丙醇，室溫30分鐘，溶解形成的結(jié)晶。在570nm波長(zhǎng)處，用酶聯(lián)檢測(cè)儀檢測(cè)各孔的光吸收值（OD）。 殺傷活性（％）＝（OD實(shí)驗(yàn)孔－OD陰性對(duì)照） /OD無殺傷對(duì)照× 100

MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)

1．取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細(xì)胞的培養(yǎng)液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液），在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3小時(shí)讓細(xì)胞帖壁（如果是懸浮細(xì)胞可直接進(jìn)行下一步） 2．用RPMI-1640培養(yǎng)液2～10倍遞次稀釋細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和待檢樣品，每個(gè)稀釋度3個(gè)重復(fù)孔。對(duì)照孔6個(gè)：3個(gè)陽性對(duì)照孔，每孔加0.1ml含大劑量細(xì)胞因子的RPMI-1640培養(yǎng)液，3個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培養(yǎng)液。在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48小時(shí)或預(yù)定的時(shí)間。 3．吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細(xì)胞，應(yīng)在吸去上清液前離心培養(yǎng)板）。 4．每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6小時(shí)。 5．每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇，在振蕩器上振蕩混勻，讓還原產(chǎn)物充分溶解。置酶聯(lián)檢測(cè)儀上測(cè)定光密度（OD）值，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm。以O(shè)D值對(duì)樣品稀釋度作圖，比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣品曲線即可求得待測(cè)樣品中細(xì)胞因子的含量。

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法簡(jiǎn)介

一、機(jī)械刮除法 1．標(biāo)記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的部位。 2．刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標(biāo)記空間。 3．用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞。 4．注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除**完全除掉為止。 二、反復(fù)帖壁法 1．待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液，用胰酶消化后，Hanks沖洗2次，加入不含血清的培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液。 2．取編號(hào)為A、B、C三個(gè)培養(yǎng)瓶。shou先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中，置溫箱中靜止培養(yǎng)5～20分鐘后，輕輕傾斜培養(yǎng)瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液，再接種入B培養(yǎng)瓶中后，向A瓶中補(bǔ)充少許完全培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。 3．培養(yǎng)B瓶中細(xì)胞5～20分鐘后，按處理A的方法，把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中，再向B瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基。 三、消化排除法 1．先是用0.5％胰蛋白酶和0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培養(yǎng)基細(xì)胞一次，然后再換成新的混合繼續(xù)消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，到半數(shù)細(xì)胞脫落下來后，便立即停止消化。 2．把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng)，向原瓶?jī)?nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后，成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落，經(jīng)過幾次反復(fù)處理，可能把成纖維細(xì)胞除凈。 四、膠原酶消化法 1．可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后，即終止消化。 2．用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，可獲純凈腫瘤細(xì)胞。如成纖維細(xì)胞未被除凈，可再次重復(fù)。

細(xì)胞培養(yǎng)中的一些試劑

一、紡錘體阻斷劑（Spindle inhibitor）     在有絲分裂過程中，隨著紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀察其形態(tài)。紡錘體的形成在于細(xì)胞質(zhì)和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因此，改變細(xì)胞質(zhì)的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開，且染色體縊痕區(qū)更為清楚。     在培養(yǎng)中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養(yǎng)前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細(xì)胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的濃度范圍比較寬，一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升，在終止培養(yǎng)前處理2—4小時(shí)。但在實(shí)際工作中需要借助濃度和處理時(shí)間來控制染色體的收縮程度。秋水仙素作用時(shí)間越長(zhǎng)，被阻斷的中期分裂相越多，但是染色體也越凝聚和收縮，所以還視各實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)而定。 二、低滲液（hypotonic solution）     低滲液是指滲透壓和離子強(qiáng)度均低于正常細(xì)胞生理?xiàng)l件的溶液，例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65M）、氯化鉀（0.075M）等。低滲效果取決于低滲液的化學(xué)組成、低滲的溫度和處理時(shí)間。低滲處理是憑借反滲透作用使細(xì)胞膨脹染色體鋪展，同時(shí)可使粘附于染色體的核仁物質(zhì)散開，以便能在一個(gè)平面上觀察所有染色體形態(tài)。     實(shí)驗(yàn)室中一般選用0.075M KCl為低滲液（具體情況取決于實(shí)際操作，鑒于實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性和穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)室采用0.35%KCl），其優(yōu)點(diǎn)有：①染色體輪廓清楚，可染色性強(qiáng)，染色時(shí)間短，②用于顯帶染色時(shí)能充分顯示帶型特點(diǎn)。     低滲處理為37℃，15－25分鐘，以預(yù)實(shí)驗(yàn)條件為準(zhǔn)。  三、固定液      固定液的重要特性是能迅速穿透細(xì)胞，將其固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性，還要能夠增強(qiáng)染色體的嗜堿性，達(dá)到優(yōu)良染色效果。   單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求，因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定液。由于Carnoyshou先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是效果良好的固定液。Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時(shí)配制，長(zhǎng)時(shí)間放置影響固定效果，固定時(shí)間15分鐘**24小時(shí)，冰箱、室溫均可。必要時(shí)可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于細(xì)胞膨脹、染色體鋪展，但易導(dǎo)致細(xì)胞破裂、染色體散失。 四、滴片     滴片使細(xì)胞懸液從一定高處落在載玻片上，淋巴母細(xì)胞膜破裂，染色體分散開。載玻片可用冰片和干片，效果均好。滴片后需空氣干燥。 五、Giemsa染色     Giemsa染料不是一種單一染料，而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物，配制后原液儲(chǔ)存。在常規(guī)染色中，并不比其他染料優(yōu)越，但在顯帶技術(shù)中，卻是無可比擬的。     Giemsa工作液在使用前臨時(shí)配制，濃度可在2.5-10%之間（原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10－40份）。染色后，染色質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核是藍(lán)色。

超凈臺(tái)工作原理及使用方法

#p#分頁標(biāo)題#e# #p#分頁標(biāo)題#e#

超凈臺(tái)的優(yōu)點(diǎn)是操作方便自如，比較舒適，工作效率高，預(yù)備時(shí)間短，開機(jī)10分鐘以上即可操作，基本上可隨時(shí)使用。在工廠化生產(chǎn)中，接種工作量很大，需要經(jīng)常長(zhǎng)久地工作時(shí)，超凈臺(tái)是很理想的設(shè)備。超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，功率145～260W左右，將空氣通過由特制的微孔泡沫塑料片層疊合組成的“超級(jí)濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂“高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3μm的塵埃、真菌和細(xì)菌孢子等等。超凈空氣的流速為24～30m/min，這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。但是萬一操作中途遇到停電，暴露在未過濾空氣中的材料便難以幸免污染。這時(shí)應(yīng)迅速結(jié)束工作，并在瓶上作出記號(hào)，內(nèi)中的材料如處于增殖階段，則以后不再用作增殖而轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)。如為一般性生產(chǎn)材料，因極其豐富也可棄去。如處于生根過程，則可留待以后種植用。 超凈臺(tái)電源多采用三相四線制，其中有一零線，連通機(jī)器外殼，應(yīng)接牢在地線上，另外三線都是相線，工作電壓是380V。三線接入電路中有一定的順序，如線頭接錯(cuò)了，風(fēng)機(jī)會(huì)反轉(zhuǎn)，這時(shí)聲音正?；蛏圆徽?，超凈臺(tái)正面無風(fēng)(可用酒精燈火焰觀察動(dòng)靜，不宜久試)，應(yīng)及時(shí)切斷電源，只要將其中任何兩相的線頭交換一下位置再接上，就可解決。三相線如只接入兩相，或三相中有一相接觸不良，則機(jī)器聲音很不正常，應(yīng)立即切斷電源仔細(xì)檢修，否則會(huì)燒毀電機(jī)。這些常識(shí)應(yīng)在開始使用超凈臺(tái)時(shí)就向工作人員講解清楚，免除不應(yīng)造成的事故與損失。 超凈臺(tái)進(jìn)風(fēng)口在背面或正面的下方，金屬網(wǎng)罩內(nèi)有一普通泡沫塑料片或無紡布，用以阻攔大顆粒塵埃，應(yīng)常檢查、拆洗，如發(fā)現(xiàn)泡沫塑料老化，要及時(shí)更換。除進(jìn)風(fēng)口以外，如有漏氣孔隙，應(yīng)當(dāng)堵嚴(yán)，如貼膠布，塞棉花，貼膠水紙等。工作臺(tái)正面的金屬網(wǎng)罩內(nèi)是超級(jí)濾清器，超級(jí)濾清器也可更換，如因使用年久，塵粒堵塞，風(fēng)速減小，不能保證無菌操作時(shí)，則可換上新的。 超凈臺(tái)使用壽命的長(zhǎng)短與空氣的潔凈程度有關(guān)。在溫帶地區(qū)超凈臺(tái)可在一般實(shí)驗(yàn)室使用，然而在熱帶或亞熱帶地區(qū)，由于大氣中含有高量的花粉，或多粉塵的地區(qū)，超凈臺(tái)則宜放在較好的有雙道門的室內(nèi)使用。任何情況下不應(yīng)將超凈臺(tái)的進(jìn)風(fēng)罩對(duì)著開敞的門或窗，以免影響濾清器的使用壽命。 無菌室應(yīng)定期用70%酒精或0.5%苯酚噴霧降塵和消毒，用2%新潔爾滅抹拭臺(tái)面和用具(70%酒精也可)，用福爾馬林(40%甲醛)加少量高錳酸鉀定期密閉熏蒸，配合紫外線滅菌燈(每次開啟15分鐘以上)等等消毒滅菌手段，以使無菌室經(jīng)常保持高度的無菌狀態(tài)。接種箱內(nèi)部也應(yīng)裝有紫外線燈，使用前開燈15分鐘以上照射滅菌，但凡是照射不到之處仍是有菌的。在紫外線燈開啟時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，可激發(fā)空氣中的氧分子締合成臭氧分子，這種氣體成分有很強(qiáng)的殺菌作用，可以對(duì)紫外線沒有直接照到的角落產(chǎn)生滅菌效果。由于臭氧有礙健康，在進(jìn)入操作之前應(yīng)先關(guān)掉紫外線燈，關(guān)后十多分鐘即可入內(nèi)。 在超凈工作臺(tái)上亦可吊裝紫外線燈，但應(yīng)裝在照明燈罩之外，并錯(cuò)開照明燈平行排列，這樣在工作時(shí)不妨礙照明。若將紫外線燈裝入照明燈罩(玻璃板)里面，這是毫無用處的，因?yàn)樽贤饩€不能穿透玻璃，它的燈管是石英玻璃，而不是硅酸鹽玻璃制成的。 接種室內(nèi)力求簡(jiǎn)潔，凡與本室工作無直接關(guān)系的物品一律不能放入，以利保持無菌狀態(tài)。接種室內(nèi)的空氣與外界空氣應(yīng)**隔jue，預(yù)留的通氣孔道應(yīng)盡量密閉。通氣孔道可設(shè)上下氣窗，氣窗面積宜稍大，需覆上4層紗布作簡(jiǎn)單濾塵。在**工作之后，可開窗充分換氣，然后再予以密閉?？傊?，既要清潔無塵無菌，又要空氣新鮮，適宜工作。覆在通氣窗上的紗布應(yīng)經(jīng)常換洗。但是上述種種措施只是理想的設(shè)計(jì)方案，往往不易全面做到，其實(shí)只要嚴(yán)格無菌操作手續(xù)，在門窗敞開的室內(nèi)，有一超凈臺(tái)的保護(hù)，接種的污染率仍可控制在生產(chǎn)上可以容忍的水平。

離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)與離心力的換算

RPM(revolution per minute)為離心機(jī)每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)；RCF(relative centrifugal field)為相對(duì)離心場(chǎng)，以重力加速度g（980.66cm/s2）的倍數(shù)來表示。    RCF與每分鐘的轉(zhuǎn)數(shù)RPM（r/min）以及離心機(jī)旋轉(zhuǎn)軸到離心管中間的距離，即平均半徑r（以cm表示）的關(guān)系為：    RCF = 1.119 x 10-5 x (rpm)2 x r

 #p#分頁標(biāo)題#e##p#分頁標(biāo)題#e#