避免污染

哺乳動物細(xì)胞在富含營養(yǎng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，其溫度有利于幾乎任何所需或不需要的微生物的生長。盡管許多研究人員在其培養(yǎng)基中使用抗生素和抗真菌劑作為預(yù)防污染的方法，但這并不能解決持續(xù)的方法學(xué)錯誤，并且常常隱瞞存在問題的事實(shí)。如果可能的話，避免使用這些藥劑，并努力改進(jìn)您的無菌技術(shù)并開發(fā)一個系統(tǒng)，以保持您的培養(yǎng)箱清潔。

培養(yǎng)箱污染的主要來源是微生物通過檢修門進(jìn)入。這可能是顯而易見的，但保持頭腦**重要將有助于您養(yǎng)成在防止完全污染方面有很長一段路的習(xí)慣。將東西放入培養(yǎng)箱時，務(wù)必戴上手套，盡量縮短內(nèi)玻璃門打開的時間。偶爾用70％乙醇擦拭門把手。每周更換一次，將水保持在濕度盤中。定期用肥皂和水擦洗鍋，然后用乙醇擦拭; 或者，對鍋進(jìn)行高壓滅菌。如果培養(yǎng)基溢出培養(yǎng)箱，請取下擱板并徹底清潔。

這些清潔儀式的頻率取決于培養(yǎng)箱獲得的流量。大型實(shí)驗室中的培養(yǎng)箱可能需要更頻繁的清潔。如果你從一個干凈的培養(yǎng)箱開始，并注意進(jìn)出的東西，它應(yīng)該保持清潔數(shù)周或數(shù)月。

多個內(nèi)門在門開啟后增加溫度和CO2恢復(fù)時間。

確保二氧化碳水平應(yīng)該是它應(yīng)有的水平

大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)基使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。CO2是該緩沖系統(tǒng)的重要組成部分，必須保持在5％才能使培養(yǎng)基保持在生理pH值。雖然基本上所有現(xiàn)代培養(yǎng)箱都配備了CO2傳感器來維持所需的CO2水平，但隨著時間的推移，校準(zhǔn)可能會偏離設(shè)定點(diǎn)，需要通過操作員直接確定CO2水平進(jìn)行偏移重新校準(zhǔn)（即，您）。

測量培養(yǎng)箱中二氧化碳水平的**簡單，**準(zhǔn)確的方法是使用氣體分析儀，如Fyrite®設(shè)備。這些可以從許多科學(xué)供應(yīng)商處購買，并且可以用于測量CO2或O2水平的模型。氣體分析儀的操作基于在待測氣體的化學(xué)吸收之后的流體的體積膨脹。使用室內(nèi)空氣（0.04％CO2）將設(shè)備“歸零”，并通過培養(yǎng)箱門或側(cè)面的端口對培養(yǎng)箱中的空氣進(jìn)行取樣。

較舊的模型培養(yǎng)箱可能需要更頻繁的重新校準(zhǔn)。**好的新型號每個月都會對CO2傳感器進(jìn)行自動重新歸零。雖然這些型號很少需要手動重新校準(zhǔn)，但用戶仍應(yīng)根據(jù)其標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）的規(guī)定，使用Fyrite裝置檢查腔室CO2水平。

保持37°C的溫度

鑒于我們的身體努力保持37°C的核心溫度，因此培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞在這個溫度下**快樂也就不足為奇了。大多數(shù)二氧化碳培養(yǎng)箱都配有一個顯示內(nèi)腔溫度的顯示器，但**好定期仔細(xì)檢查，特別是如果你注意到細(xì)胞生長不理想或不典型的話。**好使用高質(zhì)量的校準(zhǔn)溫度計來完成。打開外部和內(nèi)部培養(yǎng)箱門并將溫度計粘貼到玻璃門內(nèi)部，以便在玻璃門關(guān)閉時從外部讀取溫度。在您離開實(shí)驗室之前，請執(zhí)行此操作。第二天早上，打開培養(yǎng)箱的外門，讀取溫度計。再一次，如果讀數(shù)與37°C不同（并且溫度計準(zhǔn)確），

培養(yǎng)箱顯示：精確的溫度和CO2控制，可實(shí)現(xiàn)高細(xì)胞產(chǎn)量和活力。

保持潮濕

培養(yǎng)箱的內(nèi)部保持在相對較高的溫度，因此培養(yǎng)基的蒸發(fā)將成為沒有高??濕度的真正問題。通過將水保持在位于培養(yǎng)箱底部的托盤中，可以在培養(yǎng)箱內(nèi)保持較高的相對濕度（90％**95％）。這樣做的缺點(diǎn)是充水托盤是潛在的污染源（見上文）。

采用定期的維護(hù)和清潔計劃是保持CO2培養(yǎng)箱正常運(yùn)行且細(xì)胞無污染的**有效方法。